В последние годы все чаще встает вопрос о проблеме биоповреждений – влиянии микроорганизмов на различные материалы. Особенно часто биологическому повреждению подвергаются материалы и изделия в условиях теплого и влажного климата. Жизнедеятельность микроорганизмов, среди которых грибы, бактерии и актиномицеты, ускоряет процессы коррозии и старения металлов, приводит к потере чувствительности радиоэлектронных устройств, снижает светопропускание и отражение оптических приборов, изменяет электрические параметры электронных и электрических устройств, снижает в 2–5 раз срок службы изоляционных материалов и др. Под влиянием микроорганизмов изменяют свои свойства горюче-смазочные материалы, нарушаются режимы работы топливных систем и т. п. [1–6].

На рост и развитие микроорганизмов влияет целый ряд факторов, среди которых наиболее значимыми являются температура и влажность [7–11]. Оптимальная температура для развития большинства плесневых грибов и бактерий 25–30°С. Кроме того, чем больше в окружающей среде процентное содержание влажности, тем активнее растут микроорганизмы. Именно поэтому изделия, эксплуатирующиеся в климатических зонах с повышенной температурой и влажностью (субтропики и тропики), в значительной степени подвержены влиянию микроорганизмов.

В ВИАМ уже более 50 лет проводятся микробиологические исследования в области биоповреждений различных материалов [12–15]. При разработке материалов проводят ускоренные испытания на стойкость к воздействию плесневых грибов и нефтепродуктов. Однако при проведении лабораторных исследований невозможно учесть влияние всех климатических факторов, воздействующих на материалы при эксплуатации. Поэтому, наряду с ускоренными испытаниями в лабораторных условиях, необходимо проводить исследования в природных условиях, где происходит естественное заражение материалов микроорганизмами. Эти испытания позволяют выделять микрофлору и выявлять активные виды микроорганизмов-биодеструкторов, которые могут использоваться при проведении ускоренных испытаний, исследовать сохранность защитного эффекта антисептических препаратов.

В России наиболее благоприятной зоной для проведения этих испытаний является юг Черноморского побережья с теплым влажным (субтропическим) климатом.

В районе г. Сочи в юго-восточной части тисосамшитовой рощи была организована микологическая площадка (ИПТС РАН) для проведения испытаний в соответствии с ГОСТ 9.053–91 «ЕСЗКС. Материалы неметаллические и изделия с их применением. Метод испытаний на микробиологическую стойкость в природных условиях в атмосфере».

Микологическая площадка (участок 0,5 га) располагается в низменной, хорошо увлажненной местности, защищенной от действия ветра и затененной двухъярусной растительностью. Растительность площадки типично лесная, площадей, не покрытых лесом, нет. Почвенный покров представлен перегнойно-карбонатными выщелоченными среднемощными почвами. Таким образом, на микологической площадке созданы условия для активного развития почвенной микрофлоры.

На территории данноймикологической площадки были взяты пробы микроорганизмов. Пробы брали на трех уровнях по высоте: на земле, 0,5 и 1 м над землей. Для выделения микроорганизмов использовали чашки Петри со средой сусло–агар.

На видовой состав выделяемых микроорганизмов влияет множество факторов, в том числе условия выделения. Непосредственное отношение имеют способы приготовления питательных сред для изоляции и последующей идентификации грибов.

По своему составу питательные среды разделяются на естественные и искусственные. Естественные среды имеют неопределенный химический состав, основными компонентами таких сред являются продукты растительного или животного происхождения. Искусственные среды характеризуются постоянным химическим составом, для их приготовления используются различные минеральные соли с тем или иным источником углерода. Для культивирования почвенных грибов применяются питательные среды плотной и жидкой консистенции.

В экспериментах были использованы питательные среды на основе сусла с добавлением агар-агара для придания плотной консистенции. Известно, что универсальной питательной среды для культивирования не существует [16]. Многочисленные питательные среды обладают определенными селективными свойствами по отношению к конкретным грибным организмам или их группам. В связи с этим использовалась среда, которую наиболее широко применяют для выделения и культивирования почвенных грибов.

Сбор проб осуществляли следующим образом. Чашки Петри со средой сусло–агар располагали на всех трех уровнях (по 15 штук на каждом уровне) и открывали на 20–30 мин. После недельного выдерживания в термостате при температуре +28°С чашки Петри просматривали, появившиеся колонии микроорганизмов пересевали на новые чашки Петри со свежей средой Чапека. Пересев производили в стерильном помещении с помощью лабораторной иглы. Чашки Петри с пересеянными культурами снова помещали в термостат с температурой +28°С. После 10–12 сут культуры микроорганизмов достигали необходимых для определения размеров. Определенные культуры микроорганизмов пересевали на «косяки» с агаризованным суслом и помещали на хранение в холодильник.

В итоге из образцов выделено 18 видов мицелиальных грибов, относящихся к 10 родам, а также бактерии, актиномицеты и гриб, относящийся к классу Basidiomycetes (базидиомицет).

Список видов и родов микроорганизмов:

– Alternaria sp.;

– Aspergillus niger;

– Aspergillus flavus;

– Broomella acuta;

– Cladosporium sp.;

– Cochliobolus lunatus;

– Fusarium sp.;

– Mucor sp.;

– Myceliа sterilia;

– Penicillium albidum;

– Penicillium canescens;

– Penicillium jantinellum;

– Penicillium islandicum;

– Penicillium rugulosum;

– Penicillium solitum;

– Penicillium sp.;

– Penicillium tardum;

– Тrichoderma sp.;

– актиномицет;

– базидиомицет;

– бактерии.

Во всех пробах, взятых в разное время года, встречались виды родов Aspergillus, Trichoderma, Cladosporium, Alternaria, Fusarium, Mucor, Penicillium, Myceliа sterilia.

Анализ проб показал, что доминирование конкретных видов микроорганизмов меняется в зависимости от времени года, что естественно для любой биологической системы. В осенний период было выделенно наибольшее количество штаммов микроорганизмов.

Исследования показали, что на площадке в районе г. Сочи довольно велико видовое разнообразие микроорганизмов, в том числе мицелиальных грибов, бактерий и актиномицетов. Кроме того, доминирующие виды грибов (Aspergillus niger,Trichoderma viride, виды рода Penicillium) относятся к списку культур, рекомендуемых ГОСТ 9.049–91«ЕСЗКС. Материалы полимерные и их компоненты. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов» для проведения испытаний на грибостойкость.

Колонии вида Aspergillus niger вначале белые или светло-желтые, однако с момента образования спороношений становятся темно-бурыми, иногда почти черными. Известно, что гриб Aspergillus niger выделяют с фенопластов, с различных целлюлозных материалов, кожи, кирзы, красок, резин, алюминиевых сплавов, нержавеющей стали, титановых сплавов со следами коррозии, смазок, топлив. Вид Aspergillus flavus имеет бархатистые, пушистые или хлопьевидно опушенные колонии желто-зеленого цвета. Этот вид часто выделяют с пластмасс, входящих в состав различных изделий. Кроме того, он встречается на алюминии со следами коррозии. Виды родов Trichoderma и Penicillium также часто выделяют с материалов и изделий со следами биологического поражения [17].

Выделенные штаммы микроорганизмов пополнили набор микроорганизмов, имеющихся в ВИАМ, и будут использованы при проведении испытаний в лабораторных условиях.

Как отмечено ранее, на активность и численность микроорганизмов влияет множество внешних факторов, таких как среднесуточная температура данного района, влажность и многие другие.

Что касается температурно-влажностного режима окрестностей г. Сочи, то относительная влажность воздуха довольно высока в течение всего года: ~80%. В зимние месяцы она немного снижается, но все же достаточно высокая, и поэтому фактор влажности не лимитирует развитие микроорганизмов в течение всего года. Температура воздуха начинает заметно снижаться в декабре месяце. Наиболее холодные месяцы: декабрь–март. Средняя температура этих месяцев составляет 7–10°С.

Естественно предположить, что микробиологические процессы в эти месяцы должны затухать. Предположение строится на основе данных, полученных ранее при проведении испытаний на микробиологическую стойкость материалов в районе г. Батуми (табл. 1).

Таблица 1

Интенсивность роста грибов в течение года на микологической площадке в районе г. Батуми

Видно, что микробиологические процессы в районе г. Батуми в декабре–марте затухают, следовательно, процесс поражения материалов микроорганизмами также затухает, и в эти месяцы можно не проводить периодические осмотры материалов и изделий на микологической площадке. В связи с этим испытания на микробиологическую стойкость следует начинать в осенний период. Срок испытаний должен включать два летних периода.

Проведено сравнение видового состава микроорганизмов, выделенных на микологических площадках в районе г. Сочи и г. Батуми.

Ранее в окрестностях г. Батуми наиболее часто выделяли виды грибов, относящихся к родам Alternaria,Aspergillus, Cladosporium, Mucor и Penicillium. Из образцов, взятых на микологической площадке в окрестностях г. Сочи, выделены виды грибов, относящиеся ко всем перечисленным выше родам. Большинство этих видов преобладали и в количественном отношении. Таким образом, доминирующие роды грибов в окрестностях г. Сочи совпадают с таковыми в районе г. Батуми.

Анализ видового состава микроорганизмов на микологической площадке в районе г. Сочи свидетельствует о пригодности проведения испытаний на микробиологическую стойкость материалов и изделий согласно ГОСТ 9.053–91. Однако необходим постоянный контроль за встречаемостью и численностью мицелиальных грибов.

Для оценки соответствия микологической площадки ГОСТ 9.053–91 проводили контрольные испытания на образцах различных систем ЛКП, на хлопчатобумажных и лавсановых тканях без пропитки антисептиками. Осмотр образцов после экспозиции в течение 6 мес показал, что в условиях микологической площадки материалы обрастают микроорганизмами. Балльная оценка степени обрастания материалов микроорганизмами равна 3–4.

Исследован фунгицидный эффект биоцидных препаратов с наночастицами серебра, предназначенных для защиты неметаллических материалов [18–20]. Использованы тест-культуры, рекомендованные ГОСТ 9.049–91 и выделенные в природных условиях теплого влажного климата (район г. Сочи). Испытания проводились по методам №2 и №3 (ГОСТ 9.049–91) – табл. 2.

Таблица 2

Исследование фунгицидного эффекта биоцидных препаратов

* КБК – компонент биоцидной композиции; БК – биоцидная композиция.

Видно, что исследуемые биоцидные препараты угнетают микромицеты. По чувствительности к препаратам наиболее уязвимыми оказались микромицеты, которые рекомендованы ГОСТ 9.049–91. Выявление в природных условиях теплого влажного климата активных видов микроорганизмов-биодеструкторов позволяет использовать их при оценке сохранности защитных свойств биоцидных препаратов.

Таким образом, создана микологическая площадка, которая полностью соответствует требованиям ГОСТ 9.053–91 по всем необходимым показателям: почвенно-растительному покрову, климатическим характеристикам, геоморфологическим условиям, численности и видовому составу микрофлоры. Данная микологическая площадка является единственной на территории РФ, которая позволяет проводить натурные испытания материалов и элементов конструкций в условиях субтропического климата.